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    di Bernardo Lab - Systems and Synthetic Biology Lab
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    C2C12, C3H/10T1/2 and Hela


    C2C12: vanno seminate a 1000 cellule vitali/cm2 per farle arrivare in 3
    giorni ad una confluenza di max 70%.
    Le C2C12 vanno scongelate a 2000 cellule vitali/cm2.
    Inutile dirvi che vi é consentito mettere mano solo alla scatola della
    working cell bank (WCB), le cui aliquote sono a un p4 e sono da 200000
    cellule, per cui si scongelano in una T75.

    Per la selezione di cloni stabili di C2C12, le concentrazioni di antibiotico da usare sono:

    • G418: 600ug/ml
    • Blasticidina: 3ug/ml

     

    C3H/10T1/2: vanno seminate a 1000 cellule vitali/cm2 per farle arrivare in 3-4 ad una confluenza massima di 70%.

    Come le C2C12, anche i fibroblasti vanno scongelati ad una concentrazione doppia (2000 cellule vitali/ cm2).

    Ho fatto cryovials di WCB da 200000 cellule, per cui potete anche non ricontarle allo scongelo e seminarle in 1 T75.

    N.B. le etichette dalla WCB indicano un p4 ma in realtà sono un p5!!!

    Trasfezione: Simona ha trasfettato i fibroblasti con il costrutto CBF1RE-d2EYFP seguendo il protocollo del Mirus. Ha ottenuto i risultati migliori andando a valutare dopo 48h al microscopio.

    Per la selezione di cloni stabili delle C3H/10T1/2 la concentrazione di antibiotico da usare è:

    - G418: 600ug/mL

     

    HeLa: vanno seminate a 10000 cellule vitali/cm2 per farle arrivare in 3
    giorni ad una confluenza di circa l'80%.
    Anche le HeLa vanno scongelate ad una densitá piú o meno doppia, per cui a
    15000-20000 cellule vitali/cm2.
    Essendo le aliquote della WCB da 1,1*10ˆ6 cellule, vanno scongelate anche
    loro in una T75.

    vi prego di farmi sapere quando vi restano piú o meno una decine di
    aliquote di ogni WCB cosí da permettermi di produrne una nuova in tempi
    ragionevoli.